Route 66 (juga dikenal sebagai U.S. Route 66, The Main Street of America, The Mother Road atau Will Rogers Highway) adalah sebuah jalan raya di Amerika Serikat. Sebagai salah satu jalan nasional, Route 66 diresmikan tanggal 11 November 1926, walaupun papan namanya baru ada setahun kemudian. Aslinya berasal dari salah satu jalan di Chicago, Illinois, melalui Missouri, Kansas, Oklahoma, Texas, New Mexico, Arizona, dan California, sebelum berakhir di Los Angeles tepatnya di Santa Monica Beach dengan panjang keseluruhannya 3.940 km.

Route 66 mengalami banyak perbaikan dan perubahan yang membuat jalan tersebut berubah-ubah panjangnya. Jalan ini menjadi jalur utama para migran yang pergi ke barat dan menyokong ekonomi dari komunitas yang dilaluinya. Masyarakat yang berbisnis sepanjang jalur ini menjadi makmur seiring bertambah populernya jalan raya ini, dan mereka pula yang kemudian berjuang untuk membuat jalan ini tetap hidup walau ada ancaman karena diganti oleh sistem jalan raya antar kota yang baru.

Route 66 secara resmi dinonaktifkan (yang berarti dihilangkan dari Sistem Jalan Raya Amerika Serikat) mulai tanggal 27 Juni 1985 setelah diputuskan bahwa jalur ini tidak lagi relevan dan diganti oleh Interstate Highway System (Sistem Jalan Raya Antar Kota). Bagian jalan yang melalui Illinois, New Mexico, and Arizona telah ditetapkan sebagai National Scenic Byway (jalan berpemandangan indah nasional) dengan nama "Historic Route 66" (Route 66 yang bersejarah). Jalur ini kembali masuk ke dalam peta dengan nama barunya.